Sig. (2-tailed)معناداری

.۰۰۱

تعداد

۱۹۶

Correlation is significant at the 0.01 level (2-tailed).

جدول فوق به بررسی رابطه بین سرمایه­فرهنگی و حس­تعلق­مکانی پاسخگویان ساکن شهرجدیدپرند پرداخته است. با توجه به اینکه سطح معناداری این دو متغیر برابر با ۰۰۱/۰ (کمتر از ۰۵/۰) است، می­توان گفت رابطه معناداری بین دو متغیر وجود دارد. میزان همبستگی این دو متغیر برابر با ۲۴۳/۰- است، که نشان­دهنده همبستگی متوسط به پایین و معکوس(علامت منفی) بین این دو متغیر است و با (**) مشخص شده است. لذا با اطمینان ۹۹ درصد می­توان رابطه همبستگی بین سرمایه­فرهنگی و حس­تعلق­مکانی را معنی­دار دانست. بنابراین می­توان گفت هرچه میزان سرمایه­فرهنگی افراد بیشتر باشد، حس تعلق افراد به مکان زندگیشان کمتر می­ شود و بالعکس.

( اینجا فقط تکه ای از متن فایل پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

فرضیه سوم: به نظر می­رسد بین نگرش به ویژگی­های فضایی- کالبدی و حس­تعلق­مکانی ساکنین شهرجدیدپرند رابطه معناداری وجود دارد. (با توجه به اینکه متغیر مستقل و وابسته در این فرضیه در سطح فاصله­ای قرار دارند، بنابراین در بررسی این فرضیه از آزمون همبستگی پیرسون استفاده می­ شود).

جدول ۱۷- ۴ همبستگی بین نگرش به ویژگی­های فضایی- کالبدی و حس­تعلق­مکانی پاسخگویان ساکن پرند

حس تعلق مکانی

ویژگی­های فضایی- کالبدی

همبستگی

.۶۴۷^**

Sig. (2-tailed)معناداری

.۰۰۰

تعداد

۱۹۶

Correlation is significant at the 0.01 level (2-tailed).

جدول فوق به بررسی رابطه بین نگرش به ویژگی­های فضایی- کالبدی و حس­تعلق­مکانی پاسخگویان ساکن شهرجدیدپرند پرداخته است. با توجه به اینکه سطح معناداری این دو متغیر برابر با ۰۰۰/۰(کمتر از ۰۵/۰) است، می­توان گفت رابطه معناداری بین دو متغیر وجود دارد. میزان همبستگی این دو متغیر برابر با ۶۴۷/۰ است،که نشان­دهنده همبستگی بالا و مستقیم بین این دو متغیر است و با (**) مشخص شده است. لذا با اطمینان ۹۹ درصد می­توان رابطه همبستگی بین نگرش افراد به ویژگی­های فضایی- کالبدی و حس­تعلق­مکانی را معنی­دار دانست. بنابراین می­توان گفت هرچه ویژگی­های فضایی- کالبدی برای افراد مطلوبیت بیشتری داشته باشد، حس تعلق افراد به مکان زندگیشان بیشتر می­ شود و بالعکس.
فرضیه چهارم: به نظر می­رسد بین مدت زمان سکونت و حس­تعلق­مکانی ساکنین شهرجدیدپرند رابطه معناداری وجود دارد. (با توجه به اینکه متغیر مستقل در این فرضیه در سطح ترتیبی قرار دارد و متغیر وابسته نیز در سطح فاصله­ای است، بنابراین در بررسی این متغیر از آزمون اسپیرمن استفاده می­ شود).

جدول ۱۸- ۴ همبستگی بین مدت زمان سکونت و حس­تعلق­مکانی پاسخگویان ساکن شهرجدیدپرند

حس تعلق مکانی

۲-۲- تعاریف سیستم اطلاعات مدیریت
سیستم اطلاعات مدیریت^[۳۸] عنوانی است با کاربرد جهانی و در نشریات علمی‌و تحقیقی مطالب زیادی در مورد آن آمده است و به شکل‌های مختلف تعریف و خلاصه شده است. نظر مشترک بیشتر مطالبی که درباره‌ی سیستم اطلاعات مدیریت جمع آوری شده است آن را به این صورت تعریف کرده است که “سیستم‌های اطلاعات مدیریت مجموعه‌ای از اشخاص، داده‌ها و روش‌هایی هستند که برای فراهم ساختن اطلاعات مفید برای مدیران و کاربران با یکدیگر کار می‌کنند” (سن^[۳۹]، ۱۹۹۰، ص ۸). برای درک مفهوم سیستم اطلاعات مدیریت، نیاز است که تعاریف متعددی از آن بررسی شود، زیرا در متون مختلف صدها تعریف برای آن ارائه شده است. با این حال لادون (۱۹۹۴) معتقد است که “اکثر تعاریف تکنیکی، سیستم اطلاعات مدیریت را به عنوان گروهی از اجزاء یکپارچه که اطلاعات را جمع آوری، پردازش و ذخیره می‌سازد و اطلاعات را جهت حمایت تصمیم گیرندگان توزیع می کند تعریف نموده اند” (ص ۸). تعاریف سیستم اطلاعات مدیریت به اندازه مطالعه آن توسط محققان مختلف متعدد است ولی اکثریت آنها دارای وجوه مشترکی می‌باشد که در اینجا تنها به گزیده‌ای از این تعاریف اشاره می‌شود:

( اینجا فقط تکه ای از متن فایل پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

“سیستم اطلاعات مدیریت مجموعه‌ای نظام یافته از افراد، دستورالعمل‌ها، پایگاه داده‌ها و تجهیزات است که گزارشات لازم و روزمره مورد نیاز مدیران را جهت تصمیم گیری ارائه می کند” (صرافی زاده و پناهی، ۱۳۸۴، ص ۴۱).
مدهوشی (۱۳۷۹) با تأکید بر جنبه کامپیوتری، سیستم اطلاعات مدیریت را بدین شرح تعریف نموده است که:
“سیستـم اطلاعات مدیریت عبـارت است از یک سیستم جامع ماشین ـ کاربر، که برای آماده سازی اطلاعـات جهت پشتیبانی
عملیات و وظایف تصمیم گیری در یک سازمان به کار می‌رود؛ این سیستم از سخت‌افزار و نرم‌افزار کامپیوتری و رویه‌های کاری و پایگاه اطلاعاتی و مدلهایی جهت تجزیه و تحلیل، برنامه ریزی، کنترل و تصمیم گیری استفاده می‌کند” (ص ۱۹).
دیوید و اولسون^[۴۰] (۱۹۸۵) عقیده دارند که “سیستم اطلاعات مدیریت سیستمی‌یکپارچه متشکل از کاربر و ماشین برای ارائه اطلاعات در پشتیبانی از عملیات، مدیریت و تصمیم گیری در سازمان است. این سیستم از نرم افزار و سخت افزار رایانه ای، راهنماها و دستورالعمل‌ها، مدل‌هایی برای تحلیل، برنامه ریزی، کنترل و تصمیم گیری و یک پایگاه اطلاعات بهره می‌گیرد” (ص ۶).
در تعریفی دیگر “سیستم اطلاعات مدیریت سیستمی‌است که داده‌های محیطی را جمع آوری و داده‌های تبادلات و عملیات سازی را ثبت می‌کند و پس آنها را فیلتر، سازماندهی و انتخاب کرده و به عنوان اطلاعات به مدیران ارائه می کند” (موردیک و مانسون^[۴۱]، ۱۹۸۶، ص ۱۶)
همانطور که در تعاریف فوق مشاهده گردید اکثر محققان سیستم اطلاعات مدیریت را سیستمی‌یکپارچه می‌دانند که نیازهای اطلاعاتی مدیران و کاربران را فراهم می‌سازند. جامع ترین تعریف از سیستم اطلاعات مدیریت توسط آواد^[۴۲] در سال ۱۹۸۸ بیان گردیده است که در این پژوهش بیش از بقیه تعاریف مورد تأکید است. آواد (۱۹۸۸) سیستم اطلاعات مدیریت را بدین شرح تعریف نموده است:
“سیستم اطلاعات مدیریت سیستمی‌یکپارچه، رایانه‌ای و کاربر ـ ماشین است که اطلاعات لازم را برای حمایت از عملیات و تصمیم گیری فراهم می‌کند. عناصر اصلی این سیستم عبارتند از: ۱) سیستمی‌یکپارچه برای خدمت به تعداد زیادی کاربر، ۲) سیستمی‌رایانه ای که تعدادی نرم افزار اطلاعاتی را از طریق یک پایگاه اطلاعات به هم مرتبط می‌کند، ۳) رابط کاربر ـ ماشین که به جستجوهای فوری و موقتی پاسخ می‌دهد، ۴) ارائه اطلاعات به تمام سطوح مدیریتی و ۵) پشتیبانی از عملیات و تصمیم گیری” (ص ۵).
با مطالعه‌ی تعاریف فوق می‌توان نتیجه گرفت که سیستم اطلاعات مدیریت سیستمی‌یکپارچه و رایانه‌ای می‌باشد که اطلاعات لازم را برای مدیران فراهم می‌آورد و آنان را در تصمیم گیری یاری می‌رساند.
۲ ـ ۳ـ تاریخچه سیستم‌های اطلاعات مدیریت
در بررسی سیستم‌های اطلاعات مدیریت، مروری بر سیر تکوین آن می‌تواند، دیدگاه دقیقتری را به پژوهشگر ارائه دهد، از این رو در بخش زیر تاریخچه ای از سیستم اطلاعات مدیریت شرح داده شده است. رضائیان به نقل از اسپراگ و مک نورلین^[۴۳] (۱۳۸۵) بیان می‌کند که:
هر چند مى توان تاریخ سیستم اطلاعات مدیریت را به هولریث^[۴۴] یا حتى چارلز ببیچ^[۴۵] منتسب دانست، ولى آغاز آن از اواخر دهه ۱۹۵۰ مى باشد. در سال ۱۹۵۷، یعنى زمان عبور از عصر صنعتى به عصر اطلاعات، تعداد افرادى که بخش مهمى از کار آنها با اطلاعات و پردازش آن سر و کار داشت (کارگران اطلاعاتى)، از تعداد کارگران صنعتى بیشتر شد و در دهه ۱۹۷۰ کارکنان اطلاعاتى، بیش از پنجاه درصد از نیروى کار را تشکیل مى داند (ص ۵).
تکامل سیستم‌هاى اطلاعات مدیریت به روند و توسعه تکنولوژی کامپیوتر و ارتباطات وابسته است، با توسعه و تکامل تکنولوژى کامپیوتر و ارتباطات و اهمیت روزافزون اطلاعات در طول تاریخ، سیستم اطلاعات مدیریت نیز، تکامل و توسعه پیدا کرده است، مراحل تکامل این سیستم به شرح زیر می‌باشد:
۱ ـ مرحله اول مصادف با سال‌های دهه ی ۱۹۶۰ می‌باشد. صرافى زاده و پناهى (۱۳۸۰) بیان مى کنند که “در این مرحله به کامپیوتر به عنوان ابزارى به منظور کاهش هزینه‌هاى عملیاتى و وسیله اى جهت افزایش کارایى نگاه می‌شد. مشخصه بارز این مرحله هزینه بالاى بکارگیرى سیستم و عدم درک وشناخت، مدیران از توانایى‌هاى کامپیوتر بود” (ص ۱۹۱). “از دهه ۱۹۶۰ دیدگاه سازمان در زمینه بهره گیرى از اطلاعات رو به دگرگونى گذاشت و دریافتند که مى‎توان از آن به عنوان ابزار پشتیبانى عملیات جارى سازمان استفاده نمود، نظام‌هاى اطلاعات این دهه حالت کارگاه گزارش‎سازى در زمینه‌هاى تولید هفتگى، اطلاعات مالى ماهانه، موجودی‌ها و حساب‌های دریافتی و پرداختى را داشت” (لاودن، ۱۳۸۷ ص ۷۸).
۲ ـ مرحله دوم: “محاسبات متمرکز^[۴۶] ، شاخص سال‌هاى میانى و تا پایان دهه ۱۹۶۰ بود. سعى بر همسو نمودن امکانات کامپیوترى با عملیات سازمانى بود و جهت بهره گیرى از برنامه‌هاى کاربرى در کلیه حوزه‌هاى عملیاتى سازمان، موجى به راه افتاد” (صرافى زاده و پناهى، ۱۳۸۴، ص ۱۹۱).
۳ ـ “این مرحله از اوائل دهه ۱۹۷۰ آغاز گردید و مشخصه ی بارز این دوره جهش تکنولوژیک جهت کاهش هزینه‎ها و افزایش کارایى سیستم‌ها و عملیات خدمات رسانى کامپیوترى بود” (صرافى زاده و پناهى، ۱۳۸۰، ص ۱۹۱). لاودن (۱۳۸۷) بیان می‌کند که “در دهه ۱۹۷۰، نظام‌هاى اطلاعات رفته رفته «نظام اطلاعات مدیریت» نام گرفتند و سازمان‌ها به تهیه ابزارهاى رایانه اى چند کاره پرداختند” (ص ۷۸).
۴ ـ این مرحله مربوط به اواسط دهه ۱۹۷۰ مى باشد. لاودن در سال (۱۳۸۷) بیان می‌کند که: “اطلاعات در این دوره نقش تنظیم کننده و راه براى سازمان‌ها را بر عهده گرفته و ابزار کنترل کارآمدى در دست مدیران شد. نظام‌هاى ابداعى این دوره، نظام پشتیبانى تصمیم گیرى و نظام پشتیبانى مدیران ارشد هستند” ( ص ۷۸).
صرافى زاده و پناهى (۱۳۸۰) عقیده دارند که “گسترش کاربرد سیستم‌هاى اطلاعات مدیریت در سازمان در این دوره زمینه ورود گروهى از مدیران را به سازمان‌ها به عنوان مدیران سیستم اطلاعات مدیریت که علاوه بر توانایى فنى، مهارت‌هاى انسانى و ارتباطى را نیز دارا بودند، مهیا نمود” (ص ۱۹۲).
۵ ـ “در اوایل دهه ۱۹۷۰ توجه به تکامل کاربر ـ ماشین موجب ارائه برنامه‌هایى به شکل کاربر ـ محور بود، سیستم‎هاى پشتیبانى تصمیم گیرى قادر بود تا خواسته‌ها و کاربردهاى متعدد را پاسخ گوید” (صرافى زاده و پناهى، ۱۳۸۰، ص ۱۹۲).
جدول ۲ ـ ۱ ـ مراحل اساسی تحول سیستم‌های اطلاعات مدیریت

۴٫۴۵۲۵

توصیف متغیر روان نژندی(روان رنجورخویی)
در متغیر روان نژندی(روان رنجورخویی) کمترین امتیاز ۱۷/۱ و بیشترین امتیاز ۰۰/۴ و میانگین نمرات ۴۸۳۸/۲ و انحراف معیار آن ۶۲۱۷۵/۰ و واریانس آن برابر ۳۸۶/۰ است.
توصیف متغیر برون گرایی ( درون گرایی)
در متغیر برون گرایی ( درون گرایی)کمترین امتیاز ۵۰/۲ و بیشترین امتیاز ۷۵/۴ و میانگین نمرات ۷۱۳۷/۳ و انحراف معیار آن ۴۴۴۲۲/و واریانس آن برابر ۰٫۱۹۷است. میانگین نمرات برون گرایی ( درون گرایی)بیانگر این موضوع است که پاسخ دهندگان در سطح متوسط به بالا قرار دارند.
توصیف متغیر گشودگی( اشتیاق به تجارب تازه)
در متغیر گشودگی( اشتیاق به تجارب تازه) کمترین امتیاز ۴۲/۲ و بیشترین امتیاز ۵۰/۴ و میانگین نمرات ۲۸۸۶/۳ و انحراف معیار آن ۳۸۸۴۰/۰ و واریانس آن برابر ۰٫۱۴۶ است. میانگین نمرات گشودگی( اشتیاق به تجارب تازه) بیانگر این موضوع است که پاسخ دهندگان در سطح متوسط به بالا قرار دارند.
توصیف متغیر توافق پذیری
در متغیر توافق پذیری کمترین امتیاز ۲۵/۲ و بیشترین امتیاز ۵۸/۴ و میانگین نمرات ۲۶۱۶/۳ و انحراف معیار آن ۳۹۱۱۱/۰ و واریانس آن برابر ۰٫۱۵۲ است. میانگین نمرات توافق پذیری بیانگر این موضوع است که پاسخ دهندگان در سطح متوسط به بالا قرار دارند.
توصیف متغیر باوجدان بودن(مسئولیت پذیری)
در متغیر باوجدان بودن(مسئولیت پذیری) کمترین امتیاز ۶۷/۲ و بیشترین امتیاز ۷۵/۴ و میانگین نمرات ۸۳۸۷/۳ و انحراف معیار آن ۴۲۲۸۲/۰ و واریانس آن برابر ۰٫۱۷۸ است. میانگین نمرات باوجدان بودن(مسئولیت پذیری) بیانگر این موضوع است که پاسخ دهندگان در سطح متوسط به بالا قرار دارند.
توصیف متغیر عملکرد شغلی
در متغیر عملکرد شغلی کمترین امتیاز ۰۷/۳ و بیشترین امتیاز ۰۰/۵ و میانگین نمرات ۴۵۲۵/۴ و انحراف معیار آن ۵۰۱۸۰/۰ و واریانس آن برابر ۰٫۲۵۱ است. میانگین نمرات عملکرد شغلی بیانگر این موضوع است که پاسخ دهندگان در سطح متوسط به بالا قرار دارند.
۴-۳- بررسی نرمال بودن متغیرها
به منظوربررسی نرمال بودن متغیرهاازآزمون کولموگراف واسمیرنوف استفاده گردیده است.نتایج آزمون برای هر متغیر به شرح زیر است

( اینجا فقط تکه ای از متن فایل پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

جدول ۴-۱۰- نتایج آزمون کولموگراف-اسمیرنوف^[۶۶]

بعد

سطح معنی­داری

روان نژندی(روان رنجورخویی)

۷۷۲/۰

برون گرایی ( درون گرایی)

۸۵۳/۰

گشودگی( اشتیاق به تجارب تازه)

۳۶۵/.

توافق پذیری

۴۸۵/۰

باوجدان بودن(مسئولیت پذیری)

۹۹۱/۰

عملکرد شغلی

۱۵۶/۰

۱۸۴

^۵- ۱۰ ×۶/۱-^۶- ۱۰×۰/۵

^۱۰- ۱۰×۴/۳

۲/۷

پلی(۵- آمینو-۱، ۳، ۴-تیادیازول-۲-تیول

^۷-۱۰×۰/۴- ^۱۱-۱۰×۰/۸
^۴-۱۰×۰/۴- ^۷-۱۰×۰/۴

^۱۱-۱۰×۰/۲

۰/۳

کار حاضر

۳-۳-۲-۷- بررسی تکرارپذیری و پایداری پاسخ الکترود اصلاح شده نسبت به اکسایش الکتروکاتالیزوری نیتریت.
در این کار به منظور بررسی تکرارپذیری حسگر ساخته شده در حین اندازه‌گیری‌های نیتریت، پاسخ ولتامتری چرخه‌ای الکترود اصلاح شده با تهیه متوالی غلظت ۲/۰ میکرو‌مولار نیتریت در محلول ۱/۰ مولار بافر فسفات ۰/۳ و قرار دادن آن در سل الکتروشیمیایی و انجام ولتامتری چرخه‌ای صورت گرفت. و الکترود اصلاح شده با نیل بلو تکرارپذیری بالایی را نشان داد. بطوری‌که ۱۰ اندازه‌گیری همراه با انجام محلول‌سازی بین هر اندازه‌گیری میزان RSD برابر ۵/۳% را نشان داد که این امر بیان‌گر کارایی بالای حسگر طراحی شده جهت اندازه‌گیری نیتریت می‌باشد.
به منظور بررسی میزان پایداری پاسخ حسگرهای ساخته شده در حین اندازه‌گیری‌های نیتریت، از روش آمپرومتری استفاده شد و آمپروگرام الکترود اصلاح شده پس از تزریق نیتریت به محلول ۱/۰ مولار بافر فسفات ۰/۳ برای مدت زمان طولانی ثبت و مورد ارزیابی قرار گرفت. شکل (۳-۶۶) آمپروگرام الکترود کربن شیشه‌ای اصلاح شده با حدواسط نیل بلو را در محلول چرخان ۱/۰ مولار بافر فسفات ۰/۳ بعد از تزریق ۰/۱ میکرو‌مولار نیتریت و در پتانسیل ثابت ۸۰۰ میلی‌ولت نشان می‌دهد. همان‌طور که دیده می‌شود بلافاصله پس از تزریق نیتریت،

( اینجا فقط تکه ای از متن فایل پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

جریان افزایش و به مقدار ثابتی می‌رسد و بعد از گذشت مدت زمان ۱۰۰۰ ثانیه، حسگر حاضر ۱/۹۲% از فعالیت اول خود را حفظ کرده است. زمانی‌که حسگر طراحی شده برای مدت ۶ ماه در هوا نگهداری شد، حساسیت آن تنها ۴/۴% افت نشان داد که بیان‌گر پایداری طولانی مدت این حسگر به دلیل طبیعت کوالانسی پیوند ایجاد شده در مراحل مختلف اتصال اصلاح‌گر می‌باشد.
شکل ۳-۶۶- آمپروگرام الکترود اصلاح شده با نیل بلو بعد از تزریق ۰/۱ میکرو‌مولار نیتریت و به محلول ۱/۰ مولار بافر فسفات با pH برابر ۰/۳ و در پتانسیل ثابت ۸۰۰ میلی‌ولت و سرعت چرخش ثابت.
۳-۳-۲-۸- بررسی گزینش پذیری الکترود GCE/NB نسبت به اکسایش الکتروکاتالیزوری نیتریت.
مزاحمت‌های ممکن دیگر گونه‌ها در اندازه‌گیری آمپرومتری نیتریت، در نسبت‌های مختلف مزاحم به آنالیت بررسی شد. نتایج این بررسی در جدول (۳-۱۱) آورده شده است. در این جدول پاسخ جریان ۱/۰ میکرو‌مولار نیتریت با جریان حاصل در حضور غلظت‌های مختلف گونه مزاحم مقایسه شده است. در این مطالعه از انحراف نسبی ۵% چشم‌پوشی شد. با توجه به این نتایج حاصله در جدول ۳-۵ می‌توان نتیجه گرفت که این روش از مزاحمت بیشتر یون‌های خارجی مبرا است. با توجه به گزینش پذیری بالا و پایداری بسیار عالی این حسگر به نظر می‌رسد حسگر طراحی شده بتواند خواص بسیار خوبی را در آنالیز نمونه‌های حقیقی با حداقل نیاز به آماده سازی نمونه داشته باشد.
جدول ۳-۵- بررسی اثر مزاحمت گونه‌های مختلف در اندازه‌گیری نیتریت

نسبت غلظتی قابل تحمل

گونه‌های مورد بررسی

۵۰ برابر

یون‌های سدیم(+)، پتاسیم(+)، منیزیم(۲+)، کلسیم(۲+)، آلومینیوم(۳+)، نیترات(-) و سولفات(۲-)

۱۰ برابر

هیدروژن پراکسید، برومات و یدات

تا ۱۰۰ برابر هیچ تاثیری نشان ندادند

گلوکز، اوریک اسید و متانول

۳-۴- ترکیب روش اصلاح کوالانسی و روش اصلاح لایه به لایه برای تهیه زیست‌حسگرهای بر پایه تثبیت آنزیم گلوکز اکسیداز
۳-۴-۱- تثبیت لایه کیتوسان- گلوکز اکسیداز بر روی الکترود اصلاح شده با آمینوفنیل و ایجاد الکترود اصلاح شده کامپوزیت (GCE/AP/MNP/CHIT/GOx)

شکل ۴-۱٫ شاخص سازگاری کدون. سمت راست : قبل از بهینه سازی ، سمت چپ : بعد از بهینه سازی
بدین ترتیب میزان فراوانی کدون های بهینه^[۵۲] (FOP) نیز افزایش یافت به صورتی که کدون های کاملا اپتیموم برای توالی امینواسیدی در نظر گرفته شده از ۴۳% در توالی اولیه به ۷۰% در توالی بهینه شده افزایش یافتند. دیگر کدون ها هم در بهترین حالیت که در توالی می توانستند حضور یابند به صورت بهینه درآمدند.

( اینجا فقط تکه ای از متن فایل پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

FOP اپتیموم نشان گر بیان کاملا دقیق کدون های کد کننده امینواسیدها هستند ، بدین معنی که با توجه به میزان تغییراتی که در کل توالی می تواند صورت گیرد ، برای یک امینواسید خاص ، این کدون در میزبان بالاترین راندمان بیانی را می تواند داشته باشد (شکل ۴-۲)
شکل ۴-۲٫ میزان فراوانی کدون های بهینه. سمت چپ : قبل از بهینه سازی ، سمت راست : بعد از بهینه سازی
شاخص محتوای G-C
میانگین محتوای G-C یک توالی مناسب بین ۳۰% تا ۷۰% (بطور میانگین ۵۰%) می باشد. شاخص محتوای G-C توالی اولیه از میزان ۵۹/۴۱% به ۵۶/۴۸% در توالی بهینه سازی شده افزایش یافت که این امر سبب افزایش نیمه عمر mRNA ژن موردنظر می شود (شکل ۴-۳)
شکل ۴-۳٫ شاخص محتوای G-C. سمت راست : قبل از بهینه سازی ، سمت چپ : بعد از بهینه سازی
با توجه به پارامترهای تغییر یافته ، توالی ۱۴۶۳ نوکلئوتیدی نهایی برای ژن CD166 در شکل ۴-۴ نشان داده شده است. همچنین در شکل ۴-۵ نیز توالی اولیه و توالی بهینه سازی شده را بطور مقایسه ای و نوکلئوتید به نوکلئوتید می توان مشاهده کرد.
شکل ۴-۴٫ ترادف مولتی توپ ژنی موردنظر پس از بهینه سازی کدون های مربوطه جهت بیان در میزبان E.coli
شکل ۴-۵٫ مقایسه نوکلئوتید بصورت نظیر به نظیر در توالی های اولیه و بهینه سازی شده.
۴-۲ سنتز شیمیایی DNA موردنظر نوترکیب
توالی ژن موردنظر توسط شرکت Biomatik کانادا بصورت شیمیایی سنتز شد و درون وکتور pBSK قرار داده شد. این وکتور قبلا به نام pBMH شناخته می شد که طولی برابر با ۲۹۰۷bp دارد. این وکتور دارای ژن مقاومت به آنتی بیوتیک آمپی سیلین می باشد که می توان از آن برای جداسازی کلونی های نوترکیب استفاده کرد. طول توالی بعد از سنتز ژن به داخل پلاسمید به ۴۳۷۰ bp رسید. توالی سنتز شده تمام مراحل کنتری کیفیت را با موفقیت گذراند. از جمله این مراحل می توان به موارد زیر اشاره کرد.
تائید صحت توالی ژن نوترکیب
تائید صحت توالی پلاسمید حامل
تائید صحت شکل خواندن (Reading Frame) در فرایند رونویسی
تائید اندازه ژن سنتز شده به کمک هضم آنزیمی (شکل ۴-۶)

Gene name:CD166 ext
Clone ID#:D5913-2
RES: HindIII
Construct map:
شکل ۴-۶٫ تائید اندازه ژن سنتز شده به کمک هضم آنزیمی
تایید سحت قابلیت تکثیر ژن به کمک تکنیک PCR و عدم وجود هر گونه آلودگی در آن
کیفیت مناسب DNA سنتز شده به کمک تکنیک اسپکتروسکوپی^[۵۳]
و عدم وجود هر گونه آلودگی در آن
شکل ظاهری شفاف و عدم وجود هر گونه ذره ی خارجی در آن
سفارش مذکور به شکل پودر لیوفیلیزه و در حجم ۱۰ میکروگرم دریافت شد و سپس بصورت استوک قابل استفاده با توجه به دستورالعمل شرکت سازنده درآمد. نقشه ی ژنی پلاسمید حاوی DNA نوترکیب CD166 در شکل ۴-۷ نمایش داده شده است. در این شکل جایگاه ژن موردنظر ، نحوه قرارگیری آن در پلاسمید حامل ، جایگاه آنزیم های محدود کننده و همچنین جایگاه ژن مقاومت به آنتی بیوتیک آمپی سیلین نشان داده شده است

شکل ۴-۷٫ نقشه ی ژنی پلاسمید حاوی DNA نوترکیب CD166
۴-۳ کلونینگ پلاسمید AMP–pBSK حاوی DNACD166
جهت تکثیر پلاسمید حاوی ژن سنتز شده ارسال شده توسط شرکت تولیدی ، فرایند ترانسفورمیشن برای باکتری های کامپتنت E.coli سویه Top 10 انجام شد و از کلونی های رشد کرده در محیط دارای آنتی بیوتیک آمپی سیلین ، تک کلونی انتخاب شد و سپس از تک کلونی های انتخاب شده به روش لیز قلیایی استخراج پلاسمید صورت گرفت. جهت تائید حضور پلاسمید در محلول بدست آمده ، الکتروفورز انجام شد. با پدیدار گشتن باند ۴۳۶۶ bp در ژل ، حضور پلاسمید حاوی ژن CD166 محرز گشت. در شکل ۴-۷ ، نتیجه حاصل از الکتروفورز محصول استخراج پلاسمید نشان داده شده است.
شکل ۴-۷٫ تائید حضور پلاسمید حاوی ژن CD166 در محصول استخراج پلاسمید- از سمت راست چاهک اول نمونه پلاسمید حاوی ناحیه مورد نظر و چاهک دوم لدر DNA1kb-پیکان قرمز باندbp4366 مربوط به پلاسمید حاوی ناحیهCD166 و پیکان ابی محل باند ۳۰۰۰bp لدر .
پس از این که وجود پلاسمید در محصول حاصل از استخراج پلاسمید کلونی های ترانسفورم شده با پلاسمید حاوی ژن سنتز شده CD166 تائید شد ، به کمک تکنیک هضم دوگانه آنزیمی ، وجود ژن CD166 در پلاسمید ، با توجه به جایگاه های آنزیمی Ncol و Xhol قرار داده شده در دو سر ژن سنتز شده مورد بررسی قرار گرفت. دو باند دلخواه ۱۴۶۳ bp (CD166) و ۲۹۰۷ bp (پلاسمید pBSK) نمایان گشت که تائیدی بر وجود ژن موردنظر در پلاسمید تکثیر شده دارد.
شکل ۴-۹٫ نتیجه حاصل از هضم آنزیمی دوگانه پلاسمید تکثیر یافته pBSK را نشان می دهد.
شکل ۴-۹٫ هضم دوگانه آنزیمی پلاسمید تکثیر یافته pBSK- از سمت راست چاهک اول نمونه هضم انزیمی پلاسمید حاوی ناحیه CD166 و چاهک اول از سمت چپ لدر DNA1kb –پیکان های قرمز از بالا پلاسمید (bp 2907) و ناحیه CD166 (bp 1558) –پیکان های ابی از بالا محل قرار گیری باند bp 3000 و ۱۵۰۰bp لدر.
۴-۴ ساب کلونینگ ژن CD166
جهت بیان ژن CD166 از باکتری E.coliBL21(DE3) استفاده شد. ابتدا ژن موردنظر از ژل آگارز مرحله الکتروفورز خالص سازی شد و سپس به کمک تکنیک Ligation با پلاسمید pet-28a ترکیب شد. سپس این ترکیب به سلول های شایسته ای E.Coli BL21 ترانسفورم شد. در شکل ۴-۱۰ نقشه ژنی پلاسمید pet-28a نشان داده شده است.
شکل ۴-۱۰٫ نقشه ژنی پلاسمید pet-28a(www.smapgene.com)
این باکتری به تنهایی حساس به کانامایسین است ولی وقتی وکتور pet-28a را جذب کند نسبت به آنتی بیوتیک مقاوم شده و بر روی آگار حاوی کانامایسین تشکیل کلونی می دهد. در شکل ۴-۱۱ کلونی های رشد کرده بر روی محیط کشت حاوی آنتی بیوتیک کانامایسین بعد از ترانسفورماسیون باکتری BL21(DE3) با پلاسمید pet-28a حاوی ژن CD166 را نشان می دهد.
شکل ۴-۱۱٫ باکتری های BL21(DE3) ترانسفورم شده با pet-28a حاوی ژن CD166- از سمت راست چاهک اول ، دوم و سوم نمونه حاوی پلاسمد Pet-28a حاوی ناحیه CD166 و چاهک اول از سمت چپ لدر DNA1KB .پیکان قرمز باندbp 6957 مربوط به pet حاوی ناحیه CD166 و پیکان ابی محل باندbp 6000 لدر.
سپس از تک کلونی های رشد کرده استخراج پلاسمید به روش لیز قلیایی صورت گرفت تا وجود پلاسمید حاوی ژن موردنظر تائید شده و از طرفی وجود هر گونه آلودگی را از بین می برد. برای تائید وجود پلاسمید pet-28a در محصول استخراج پلاسمید ، الکتروفورز صورت گرفت و با تشکیل باند در ۶۸۳۲ bp ، این ادعا تحقق یافت. در شکل ۴-۱۲ ، نتیجه الکتروفورز محصول استخراج پلاسمید pet-28a از سلول های ترانسفورم شده BL21(DE3) ، نشان داده شده است.
شکل ۴-۱۲٫ تائید حضور پلاسمید pet-28a حاوی ژن CD166 در باکتری ترانسفورم شده BL21(DE3)
پس از این که وجود پلاسمید pet-28a در محصول حاصل از استخراج پلاسمید کلونی های ترانسفورم شده با پلاسمید حاوی ژن سنتز شده CD166 تائید شد ، به کمک تکنیک هضم دوگانه آنزیمی ، وجود ژن CD166 در پلاسمید ، با توجه به جایگاه های آنزیمی Ncol و Xhol قرار داده شده در دو سر ژن سنتز شده مورد بررسی قرار گرفت. دو باند موردنظر ۱۴۶۳ bp (ژن CD1669 و ۵۳۶۹ bp (پلاسمید pet-28a) نمایان گشت که تائیدی بر وجود ژن موردنظر در باکتری ترانسفورم شده است. شکل ۴-۱۳ ، نتیجه حاصل از هضم آنزیمی دوگانه پلاسمید pet-28a حاوی ژن CD166 را نشان می دهد.
شکل ۴-۱۳٫ نتیجه حاصل از هضم آنزیمی دوگانه پلاسمید pet-28a حاوی ژن -CD166 چاهک اول از سمت چپ لدر DNA1kb و چاهک های دوم سوم و چهارم نمونه هضم انزیمی pet حاوی CD166 –پیکان های ابی از بالا باندهای ۶۰۰۰ وbp 1500 لدر و پیکان های قرمز از بالا باند ۵۳۹۶ ((pet28 و هم چنین bp1500 CD166
۴-۵ بیان پروتئین CD166 و تائید آن به کمک تکنیک SDS-page