تصاویر محصولات PCR در شکل های ۴-۲ ، ۴-۳ ، ۴-۴ و ۴-۵ نشان داده شده است . در تصاویر حاصل از این کار، باندهای نشانگر وزن مولکولی در سمت چپ تصویر به صورت باندهایی مرتب و نردبانی شکل با اندازه bp 100 قابل مشاهده است و در کنار نشانگر وزن مولکولی، نمونه کنترل منفی به دلیل فقدان DNA بیمار بدون ایجاد باند دیده می شود، سپس باندهای ایجاد شده محصولات PCR به ترتیب با ایجاد باندهای مرتب و در محاذات حدوداً bp 750 نشانگر وزن مولکولی قابل مشاهده هستند.
۸ ۷ ۶ ۵ ۴ ۳ ۲ ۱ کنترل منفی Ladder
۱۰۰۰
۹۰۰
۷۵۰
۵۰۰
۳۰۰
۱۰۰
شکل ۴-۲- نتایج محصولات PCR بیماران ۱تا ۸٫ در این بیماران پس از انجام PCR،محصولات بر روی ژل
آگاروز ۵/۱ درصد با ولتاژ ثابت ۱۲۳ ولت برده شد . پس رنگ آمیزی باندهای DNA ی ۷۵۹جفت بازی با
نشانگر وزن مولکولی bp 100 مقایسه گردید. که نتایج قابل قبول می باشد.
۱۴ ۱۳ ۱۲ ۱۱ ۱۰ ۹ Ladder
۸۰۰
۷۰۰
شکل ۴-۳- نتایج محصولات PCR بیماران ۹تا ۱۴٫ در این بیماران نیز پس از انجام PCR، محصولات بر روی ژل آگاروز
۵/۱ درصد با ولتاژ ثابت ۱۲۰ ولت برده شد . پس رنگ آمیزی باندهای DNA ی ۷۵۹جفت بازی با نشانگر وزن مولکولی
bp 100 مقایسه گردید. که نتایج قابل قبول می باشد. در این الکتروفورز نمونه کنترل منفی قرداده نشده است.
۱۳ ۱۲ ۱۱ ۱۰ ۹ ۸ ۷ ۶ ۵ ۴ ۳ ۲ ۱ Control- Ladder
۱۰۰۰
۸۰۰
۷۰۰
۵۰۰
۲۰۰
۱۰۰
شکل ۴-۴- نتایج محصولات PCR گروه شاهد ۱تا ۱۳٫ در گروه شاهد پس از انجام PCR ، محصولات بر روی ژل آگاروز
۵/۱ درصد با ولتاژ ثابت حدود۱۲۳ ولت برده شد. پس رنگ آمیزی باندهای DNA ی ۷۵۹جفت بازی با نشانگر وزن مولکولی
bp 100 مقایسه گردید . در این الکتروفورز نمونه کنترل منفی قرداده شده است. باندهای ایجاد شده در افراد شماره ۹ و ۱۱
و ۱۳ دارای وضوح بالایی نبودند، و به حالت دایمر نیز دیده شدند بنابراین مجدد روی ژل آگاروز برده شدند.

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

۱۳ ۱۱ ۹ Control- Ladder

شکل ۴-۵- نتایج محصولات PCR گروه شاهد ۹ و ۱۱ و ۱۳٫ همانطور که ذکر شد باندهای ایجاد شده در افراد
شماره ۹ و ۱۱و ۱۳ دارای وضوح بالایی نبودند، و حتی به حالت دایمر نیز دیده شده اند. بنابراین مجدد روی ژل
آگاروز ۵/۱ درصد برده شدند. و نتایج مطلوب بود.
۴-۵- تایید نتایج با روش تعیین توالی
پس از تکثیر نمونه ها و الکتروفورز محصولات PCR ، و مشاهده باندهایی مطلوب ، نمونه های تکثیر شده برای انجام واکنش تعیین توالی از طریق شرکت “دانا ژن پژوه” به کشور کانادا ارسال و تعیین توالی گردیدند. برای صحت و تأیید نتایج، تعیین توالی به صورت دو طرفه انجام پذیرفت. به عبارتی سکانس ها هم با پرایمر Forward و هم با پرایمر Revers خوانده شدند. که در کل ۱۴ بیمار PCOS و ۱۳ نمونه کنترل سالم مورد بررسی قرار گرفت.
هدف از تعیین توالی نمونه ها، مشاهده تغییرات نوکلئوتیدی در الکتروفلئوروگرام هایی است که توسط شرکت فرستاده شده اند، می باشد. به عبارتی، از طریق تعیین توالی می توان تشخیص داد، آیا فرد مورد نظر دچار جهش در کدون و باز مربوطه است یا نه. اگر دچار جهش باشد، مجدداً بررسی می شود که این جهش به صورت هتروزیگوت (یک آلل دچار جهش است) و یا به صورت هموزیگوت (هر دو آلل فرد دچار جهش است) می باشد. اگر در شکل یک منحنی از باز مربوطه داشتیم، حالت هموزیگوت سالم یا جهش یافته را داریم. و اگر ۲ منحنی روی هم قرار گرفته باشند، وضعیت هتروزیگوت SNP خواهد بود.
ترادف ها توسط نرم افزار FinchTV یا کروماز (Chromas) خوانده شد و برای مقایسه و اطمینان از وجود یا عدم وجود پلی مورفیسم و یا جهش در سایت EMBL-EBI با توالی نرمال و طبیعی، انطباق (Blast) داده شدند. سپس نتایج مشاهده شده توسط نرم افزار SPSS Version 19 ، محاسبه شد. که در جدول ۴-۳ نشان داده شده است.